Comparativo entre as técnicas de análise em DNA  (PCR-STR x RFLP-VNTR)

São duas as técnicas de análise do DNA mais utilizadas nos exame de investigação de paternidade, desde a primeira publicação da utilização do DNA no estudo do vínculo genético (Jeffreys, 1985):

1. RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) que estuda o VNTR (Variable Number of Tandem Repeats) através da hibridização de sondas multilocais ou unilocais e

2. PCR (Polymerase Chain Reaction) que estuda os locus (loci) STR (Short Tandem Repeat) pela amplificação destes.

 

Ambas as técnicas estudam os marcadores genéticos, seqüências de DNA polimórficas, isto é, apresentam muitas variações, o que permite que cada indivíduo possua uma seqüência única que o individualiza, por isso chamada também de "impressão digital do DNA". Estas seqüências quando combinadas permitem que um indivíduo seja identificado sem erro pelo seu DNA.

Ambas as técnicas estudam os marcadores genéticos, e os comentários a seguir fornecem termos comparativos, para decidirmos qual delas é melhor.

A tecnologia de RFLP:

1. Precisa de muito DNA, não podendo ser utilizada em casos onde o DNA se encontra degradado.
2. Utiliza hibridização de sondas radioativas ao DNA.
3. É mais lenta.
4. Apresenta limitações técnicas de não detecção de alelos de tamanhos extremos.
5. Impossibilidade de determinação precisa dos alelos observados, o que dificulta comparações acuradas de resultados entre laboratórios.
6. Taxa de mutação muito mais elevada que dos loci STR, o que aumenta a chance de falsas exclusões de paternidade.
7. Não pode ser automatizada
8. É mais cara.
9. É mais polimórfica sendo mais informativa.

Entretanto a tecnologia da PCR que analisa os STR:

1. Necessita de pouco DNA, permitindo a utilização de pequenas amostras, colhidas a partir de swab da mucosa bucal (saliva), DNA extraído a partir de ossos, manchas de sangue, etc...
2. Facilidade de exame pré-natal, em recém-nascidos e em vestígios de crimes
3. Determinação simultânea do sexo dos indivíduos testados, importante para evitar uma possível troca de amostras.
4. É mais rápida.
5. A análise dos resultados baseia-se na determinação exata dos alelos, através da comparação direta com escadas alélicas definidas e validadas internacionalmente, sendo significativamente mais precisa.
6. Facilidade de padronização da técnica intra e inter laboratórios, permitindo comparações precisas entre os mesmos.
7. Facilidade de montar bancos de dados da população local.
8. Menor taxa de mutação.
9. Possibilidade de automatização.
10. Menor preço.
11. Menor polimorfismo.
12. Possui muito mais marcadores validados que a técnica de RFLP-VNTR.

Com a descoberta de cada vez mais marcadores STR, permitiu-se o desenvolvimento de amplas baterias de testes de loci STR, fazendo com que a tecnologia de PCR-STR seja atualmente o padrão internacional para a identificação humana e investigação do vínculo genético, fato este sendo observado pela substituição da técnica de RFLP-VNTR pela de PCR-STR sistematicamente, como foi comprovado pelo estudo feito com os laboratórios que participaram dos Workshops de Teste de Paternidade de 1997 a 1999 realizados pela International Society of Forensic Genetics, tendo-se observado o decréscimo dos laboratórios que utilizavam o VNTR rotineiramente de 83 % em 1997, para 66 % em 1999.

Nos três workshops realizados mais de 90% dos laboratórios utilizavam a PCR como sistema de base.

Outros exemplos são: o conjunto de 13 loci definidos pelo FBI a partir de 1998 e adotados pela Interpol para a construção de banco de dados genéticos para a identificação de criminosos em nível mundial, baseiam-se exclusivamente em loci STR, e que no exercício internacional de controle de qualidade do Grupo Espanhol e Português da International Society of Forensic Genetics do ano 2000 somente 6 dos 57 laboratórios que participaram, utilizavam a técnica de RFLP-VNTR, mesmo assim como uma técnica adicional a da PCR-STR.

Por estas razões é que o Laboratório Citocamp decidiu trabalhar com o método PCR-STR, oferecendo assim a mais alta tecnologia da atualidade, ao menor preço.